Rodzicielskie pochodzenie dodatkowego chromosomu w trisomii 21 jako wskazane przez analizę polimorfizmów DNA ad

W 186 rodzinach proband był dzieckiem z bezpłatną trisomią 21 (bez translokacji); u 14 badany był płodem z trisomią 21 zdiagnozowaną po testach prenatalnych. Żadna rodzina nie miała więcej niż jednego potomstwa z trisomią 21. Jedyne odchylenie w selekcji wynikało z chęci rodzin do udziału w badaniu. Świadoma zgoda została uzyskana w laboratorium lub klinice pochodzenia. Tabela pokazuje liczbę rodzin badanych w każdym ośrodku i średni wiek rodziców przy narodzinach dziecka z trisomią 21. Znaczniki polimorficzne DNA
DNA o dużej masie cząsteczkowej wyizolowano z leukocytów krwi obwodowej, jak opisano w innym punkcie10. Większość polimorfizmów DNA oceniano za pomocą standardowej analizy Southern blot, która obejmowała trawienie enzymami restrykcyjnymi endonukleaz genomowego DNA, elektroforezę w żelu agarozowym i przeniesienie fragmentów DNA do nitrocelulozy lub filtrów nylonowych, hybrydyzacja z radioaktywnymi sondami, przemywanie i autoradiografię. 9, 11 Liczba polimorfizmów DNA została oceniona po amplifikacji PCR8 i wykrywaniu polimorficznych alleli w żelach poliakrylamidowych.12, 13 Wszystkie DNA polimorfizmy, które zostały ocenione na mapie na długim ramieniu ludzkiego chromosomu 21.
Kombinacje sondy i enzymu stosowane w analizie Southern blot (od najbardziej centromerowego do najbardziej telomerycznego) to D21K9-TaqI locus D21S13; p21-4U-MspI locus D21S110; pPW228C-BamHI locus D21S1; pPW236B-EcoRI lokusu D21S11; pPW245D-Hindlll lokusu D21S8; B2.3-Ncol / Bglll genu białka prekursorowego amyloidu (APP); pCW21pcq-SstI locus D21S111; SOD-1-MspI genu dysmutazy ponadtlenkowej; Fr8-77 lokusu D21S82, który wykrywa polimorfizm ze zmienną liczbą powtórzeń tandemowych (VNTR) i co najmniej trzema różnymi allelami; H33et-2-MspI onkogenu ETS-2; pPW231C-Hindlll i pPW231C-TaqI locus D21S3; p78 / 2-8b-PstI genu MX1; pMCT15 locus D21S113, który wykrywa polimorficzny układ VNTR; pGPFKL3.3-KpnI typu wątrobowego genu fosfofruktokinazowego (PFKL); CRI-L427 locus D21S112, który wykrywa wysoce informacyjny marker polimorficzny VNTR; i ML18 genu COL6A1, który także wykrywa bardzo informacyjny polimorfizm VNTR (patrz Petersen i wsp.7 i Warren i wsp. 9 w celu opisu sond). Markery polimorficzne DNA wykryte po amplifikacji za pomocą PCR były powtórzeniem dinukleotydu (GT) n w czwartej sekwencji pośredniej (IVS4) genu o wysokiej masie cząsteczkowej 14 (HMG14), powtórzeniu (GT) n w IVS5 genu HMG14 , polimorfizm w łańcuchu poli (A) powtórzenia elementu Alu przy IVS5 genu HMG14 i powtórzenie (GT) n locus D21S156. Startery oligonukleotydowe stosowane w amplifikacji PCR zostały opisane gdzie indziej, podobnie jak szczegółowe protokoły laboratoryjne do znakowania specyficznych starterów i programów PCR, elektroforeza w żelu poliakryloamidowym produktów PCR i autoradiografia.13 14 15 Kolejność loci opisane powyżej na długim ramieniu ludzkiego chromosomu 21 określono za pomocą analizy sprzężeń z dużymi rodowodami rodowodowymi Centre d Etude du Polymorphisme Humain (CEPH) 7 oraz elektroforezą w żelu pulsacyjnym i mapowaniem za pomocą odpowiednich hybryd komórek somatycznych. 6
Rodzicielskie pochodzenie nadliczbowego chromosomu 21, a zatem rodzicielskie pochodzenie niediagnozy, określono po punktacji polimorficznych alleli u rodziców, probanda i rodzeństwa, jeśli są dostępne.
[hasła pokrewne: granulocyty zasadochłonne, choroba sjogrena, włosień spiralny ]